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回收率实验总不合格,忽高忽低?也许是杂质溶解性在作怪!
时间:2020-12-23

在药品分析方法建立和验证的过程中,准确度验证是其中极为重要的一项。作为分析人员,你是否会遇到回收率实验总不合格,结果忽高忽低?这也许是杂质溶解性在作怪!以下是我在实际工作过程中对于方法建立、化合物溶解性与回收率方面的一些心得,与大家分享。


对于方法建立起初需要对化合物的性质进行预判,对化合物和其相关杂质的溶解度进行考察,以备选择正确的稀释液以及稀释液配比。


如果稀释液及其比例的选择不正确,会在分析方法建立之初及方法学验证阶段出现问题。


image.png


下面是稀释液配比不一致,造成回收率试验波动较大的典型案例:


准确度验证原方案


稀释剂


0.1mol/L盐酸-甲醇(1:9)


供试品


取本品约10mg,精密称定,置50ml量瓶中,加0.1mol/L盐酸5ml,超声5分钟使溶解,放冷至室温,用甲醇稀释至刻度,摇匀


杂质储备液


精密称取杂质对照品2mg,置10ml量瓶中,加0.1mol/L盐酸1ml使溶解,用甲醇稀释至刻度,摇匀。精密量取1ml,置20ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得(1000%)


对照品溶液


精密量取杂质储备液1ml,置10ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀


回收率溶液


取本品约10mg,精密称定,置50ml量瓶中,加0.1mol/L盐酸5ml,超声5分钟使溶解,放冷至室温,加适量甲醇后,分别精密加入杂质混合储备液各1ml、5ml、7.5ml,分别用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得20%-1、100%-1、150%-1回收率溶液。


说明


验证限度为0.5%


试验结果


image.png


分析原因


➜两次回收率结果检测不平行,重现性结果差异大。


➜增大称样量、增大移液体积、更换实验员操作,排除了人员仪器操作等因素。


➜分析实验方案,对比可知对照品溶液和回收率溶液溶剂配比不一致。


①空白溶剂:0.1mol/L盐酸-甲醇(1:9)


②对照品溶液溶剂配比:0.1M盐酸-甲醇(0.0005ml:0.9995)=(1:1999)


③100%回收率溶液溶剂配比:0.1M盐酸-甲醇(5.0005ml:44.9995)≈(1:9)


➜回收率偏高,原因分析:


对照品溶液中杂质峰面积偏小:杂质在0.1mol/L盐酸中易溶解,后步稀释采用甲醇稀释,可能会导致该杂质析出,从而使对照品峰面积偏小;因此会导致回收率偏大。


结论


杂质与API受溶解度影响较大,肉眼明视溶液澄清,但内在溶解性存在差异,导致回收率重现性差异较大。


验证试验

保障稀释液配比一致,后步稀释用稀释剂溶解。


杂质储备液


精密称取杂质对照品2mg,置10ml量瓶中,加0.1mol/L盐酸1ml使溶解,用甲醇稀释至刻度,摇匀。精密量取1ml,置20ml量瓶中,用稀释剂稀释至刻度,摇匀,即得(1000%)


对照品溶液


精密量取杂质储备液1ml,置10ml量瓶中,用稀释剂稀释至刻度,摇匀


image.png


经验总结


➜各杂质与API溶解性在分析方法建立及验证中微妙变化会影响实验结果;


➜溶剂的选择、重现性验证在分析方法建立中尤为重要;


➜试验操作精准,排出操作误差、设备误差,更有利于结果分析判断。


温馨提示


主成分在稀释剂中的饱和溶解度,最好满足饱和溶解度大于3倍的供试品浓度!

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