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  • 小鼠肝炎病毒(MHV)检测试剂盒

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  • 海思安生产的实验动物测试剂盒(酶联免疫法),与XpressBIO品牌、中检所的实验动物测试剂盒相比,海思安生产的耗时短、灵敏度高、操作方便、通量高。
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小鼠肝炎病毒ELISA抗体检测试剂盒说明书


【产品名称】

通用名称:小鼠肝炎病毒ELISA抗体检测试剂盒(酶联免疫法)

英文名称:Anti-MHV Ab ELISA


【包装规格】

48T/盒、96T/


【预期用途】

用于定性检测小鼠血清样本中的肝炎病毒IgG抗体。


【检验原理】

本试剂盒采用间接法原理定性检测小鼠血清样本中的肝炎病毒抗体IgG(MHV IgG)。以小鼠肝炎病毒抗原包被酶标板,待检小鼠血清中的肝炎病毒抗体与包被抗原反应,洗涤除去未结合的抗体,再与酶标记的抗小鼠IgG抗体结合,形成抗原-抗体-酶标抗体复合物,洗涤除去未结合的酶标记物,再加入底物TMB显色,终止液终止反应后,用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD 值),待测样品的浓度与OD值成正比关系,并通过与CUTOFF值相比较,从而诊断受检小鼠是否感染肝炎病毒。


【主要组成成分】

名称

96T配置

48T配置

备注

微孔酶标板

8×12

8×6

包被小鼠肝炎病毒抗原

阴性对照

1mL

0.5mL

不含小鼠肝炎病毒抗体,即用型

阳性对照

1mL

0.5mL

含一定量的小鼠肝炎病毒抗体,即用型

小鼠酶结合物

12mL

6mL

HRP标记的抗小鼠IgG,即用型

清洗缓冲液(10X )

50mL

25mL

按说明书进行稀释

样本稀释液

40mL

20mL

含磷酸盐缓冲液

底物

12mL

6mL

TMB需避光

终止液

6mL

3mL

含硫酸

封板膜

2

2

说明书

1

1

自封袋

1

1


【适用仪器】

各类国产或进口酶标仪均可使用,检测波长450nm参比波长620/630nm


【储存条件及有效期】

试剂禁止冷冻,避免阳光直射,在2℃8℃储存条件下,未开封试剂有效期为12个月。

试剂盒开封后,未使用完的试剂保存在2℃8℃3个月内试剂盒性能可保持稳定。

试剂盒生产日期和效期见试剂盒外包装。


【样本收集、处理及保存方法】

1. 血清:采集适量小鼠血液于1.5mL离心管中,室温静置3060min3000 rpm 离心10min,收集血清样本以备后用建议采用心脏取血方法,获得的血清更为清亮

2. 保存:样本收集后短时间(3天内)可保存于28℃,如需长期保存,可分小体积冻存于-20℃一下,避免反复冻融;

3. 用于检测的样本应澄清透明,避免使用溶血样本,若有悬浮物应离心去除。


【检验方法】

测试前的准备:

1. 在进行测试前请先完整阅读使用说明书,并严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

2. 试剂盒保存在28℃,使用前室温平衡20分钟,从冰箱取出的浓缩清洗缓冲液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

3. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。

4. 所有液体组分使用前充分摇匀。

5. 预处理后的样本请按照操作步骤用样本稀释液适当稀释以达到试剂盒的最佳检测效果。

6. 清洗缓冲液的稀释:蒸馏水按19稀释,即1份的清洗缓冲液加9份的蒸馏水。

7. 将恒温箱温度调整至37℃,待温度稳定后使用。


操作步骤:

1)从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用铝箔袋密封放回4℃

2)设置阴、阳性对照孔(100μL/孔,即用型)各1空白对照1孔(双波长检测可不设置空白对照孔)

3)待测样本稀释:将样本用样本稀释液按照1100的比例稀释,(如:将待测血清按序排列在试管架上,在深孔板内加入样本稀释液300μL/孔,再加待测样本3μL,震荡10s,)取100μL加入样本孔,用封板膜封板膜/自封袋封住反应孔,37℃孵育30min

4) 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加300μL洗涤液,静置3060s,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

5) 随后每孔加入小酶结合物100μL空白孔除外,用封板膜/自封袋封住反应孔,37℃30min

6) 重复步骤4)

7) 每孔加入底物100μL37℃避光孵育15min

8) 每孔加入终止液50μL,立即测试结果。

9) 以空白孔调零,用酶标仪450nm单波长测定各孔OD值,或直接采用450nm-620/630nm双波长测定各孔的OD(加入终止液15min内读取)。推荐使用双波长检测


【阳性判断值】

1. CUTOFF=2.1×阴性对照OD值;

2. 样本OD值≥CUTOFF,判定为阳性;

3. 样本ODCUTOFF,判定为阴性;

4. 阴性对照小于0.10时以0.10计算0.10按实际值计算

5. 阴性对照OD值正常范围应<0.15,阳性对照OD-阴性对照OD0.6以上实验结果成立,否则实验可能产生偏差,需重新测试。

6. 用本试剂盒检测结果肉眼可见黄色,但测试结果在阳性判断值附近0.3OD值≥0.21可疑样本,建议重新测定,动态观察。


【产品性能指标】

1. 阳性符合率:用10份企业阳性参考品检测,结果不得出现假阴性

2. 阴性符合率:10份企业性参考品检测,结果不得出现假

3. 特异性:测试小鼠鼠痘病毒、小鼠肺炎病毒、小鼠呼肠孤病毒III型、小鼠细小病毒、小鼠仙台病毒阳性血清无交叉反应;

4. 重复性:批间差及批内差均均15%


【检验方法的局限性】

1. 所有高敏感性的免疫实验系统,都潜在非特异性,因此不可接受的阳性结果可能是由于ELISA方法的生物学假阳性造成的。

2. 任何阳性结果均需要结合小鼠自身环境,身体状况等综合判定。

3. 检测为阴性的样本不能完全排除没有MHV感染,因为不同个体从感染到产生抗体的时间不同。感染初期,抗体滴度很低可能会导致假阴性结果,应在714天内复查,复查时同时平行检测上次采集的样本以确认是否出现血清学阳转或滴度明显升高。

4. 试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或人体实验。

5. 本试剂盒为定性试剂,不能作为定量试剂使用。


【注意事项】

1. 操作前仔细阅读使用说明书,严格按照试剂盒说明书进行试验操作。

2. 不得混用不同批号的试剂,不要使用超过有效期的试剂。

3. 微孔板须密封防潮,从冷藏环境中取出时,应置室温平衡至潮气尽干后方可开启使用,余者封存置28℃短期内使用

4. 微量移液器吸嘴不可混用,以免交叉污染。

5. 孔内样本需震荡混合均匀,避免有气泡存在。

6. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

7. 应严格遵守标本收集与储存的要求,若标本混浊,请离心弃沉淀后再使用。

8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按照传染物处理。

9. 由于方法学或抗体特异性等原因,使用不同生产商的试剂对同一份样本进行检测可能会得到不同的测试结果,因此,用不同试剂检测所得结果不应直接相互比较,以免造成错误的结果解释


更多产品资讯,可以联系我们,电话:18824625256  固定电话:0755-89218110



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